【摘要】目的探讨慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)核心区Leu60Val变异与机体细胞免疫水平的关系。方法通过流式细胞分析技术(FCM)检测外周血T淋巴细胞亚群,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清细胞因子[干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素2(IL-2)]水平,采用聚合酶链反应(PCR)扩增HBVDNAC基因区片段,并对PCR产物直接测序……
【摘要】 目的 探讨慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒(HBV)核心区Leu60Val变异与机体细胞免疫水平的关系。 方法 通过流式细胞分析技术(FCM)检测外周血T淋巴细胞亚群,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清细胞因子[干扰素γ(IFN-γ)、
肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素2(IL-2)]水平,采用聚合酶链反应(PCR)扩增HBV DNA C基因区片段,并对PCR产物直接测序。 结果 91例慢性乙型肝炎患者发生Leu60Val变异者19例,变异率为20.9%,随病情加重变异率逐渐增加,以重型肝炎组最高;Val60变异株组IFN-γ、TNF-α水平明显增高(t值分别为2.584、4.766,P<0.01),CD4+ /CD8+比值逐渐升高(t=2.275,P<0.05)。 结论 Val60变异株可能通过增加与Ⅰ类人白细胞抗原(HLA-I)的亲和力,或上调HLA-I类分子的表达,从而激活大量的细胞毒性T淋巴细胞释放细胞因子,并同时在肝脏局部发挥免疫效应,提高对宿主的杀伤力。
【关键词】 肝炎病毒,乙型; 变异; 细胞因子; T淋巴细胞亚群; 序列
Relationship between the HBV core gene mutation and the cellular immunity in host LI Jia, ZHU Li-min, LIANG Shu-ren, LI Shun-tian, XU Jian. Tianjin Infectious Diseases Hospital, Tianjin 300192, China
【Key words】 Hepatitis B virus; Mutation; Cytokines; T-lymphocyte subpopulations; Sequence
资料与方法
1.病例选择:病例为天津
传染病医院1999年10月~2001年10月收治的91例慢性乙型肝炎患者,其中轻度21例,年龄(34.95±11.38)岁;中度24例,(36.05±13.45)岁;重度23例,(35.45±10.47)岁;重型肝炎23例,(39.71±12.20)岁。血清甲、丙、丁、戊、庚型肝炎病毒血清学标志检测均阴性。诊断符合符合2000年西安修订的病毒性肝炎诊断标准[1]。
3.血清细胞因子检测:IFN-γ、TNF-α和IL-2试剂盒购自美国Gibco公司。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测,一抗为生物化学抗体,二抗为辣根过氧化物酶标记的streptavidin,用标准品绘制曲线并计算429nm吸光度时标本浓度。