探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因组存在前-X基因. 乙型肝炎病毒(HBV)基因组内部结构基因与编码基因之间相互重叠，是基因组序列高度集中利用的一个典型. 早期研究中确定了编码病毒蛋白的4个开放读码框架(ORF)，本研究通过对于中国HBV感染者的流行病毒株的基因序列进行分析比较，阐明基因组结构的特点，并探索是否存在新型ORF的可能性.

考虑到HBV基因组序列的准种特点以及多聚酶链反应(PCR)技术的精确度，我们采用的技术是长距离且精确PCR(LA-PCR)技术，根据中国HBV患者的病毒基因序列设计PCR扩增用引物，自慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBV基因组序列，克隆入pGEM Teasy质粒，挑选克隆进行全基因组DNA测序，与其他HBV基因组序列进行比较.

测序结果提示来源于2个患者的5株HBV全基因组核苷酸序列在X基因之前存在一ORF，我们命名其为前-X(pre-X)区. 前-X区编码氨基酸与X蛋白融合表达， 该编码序列仅在adr血清型中有编码表现.

在HBV基因组中存在有一新的ORF，命名为前-X区，该区可能是一种HBV血清型特异性编码区.

 乙型肝炎病毒(HBV)基因组全长3 200个核苷酸(nt)左右，为部分双链DNA病毒. Galibert et al [1，2]于1979年发表了HBV基因组的第一个全长核苷酸序列，长度为3 182 nt，血清型为ayw亚型，我国学者[3-5]于1984年报道了中国大陆流行的adr亚型全序列. Galibert et al [1]最初的研究将HBV基因组划分出4个开放读码框架(ORF)，分别命名为S、C、P、X区. 1990年Loncarevic et al [6]克隆了一株adr血清型的HBV基因组，发现了前-X基因，并初步认为是adr血清型特异性的一段序列.Takahashi et al [7]于1995年的初步研究认为前-X区变异与肝细胞癌(HCC)的形成有关，之后在1998年发表[8]的研究报告中发现来源于HCC患者的40个全HBV基因序列中，有18株具有前-X基因，且均为adr血清型.我们应用长距离并且精确PCR技术(long and accurate PCR，LA-PCR)研究了乙型肝炎患者血清中存在的HBV病毒子基因组，证实前-X基因存在于中国大陆流行HBV株中.

  应用的LA-PCR试剂成套试剂均购自日本Takara公司，pGEM Teasy载体、玻璃奶试剂、和琼脂糖凝胶为Promega公司产品，细菌JM109为本室保存，蛋白酶K为Merck公司产品，酚、氯仿、氨苄青霉素、X-gal等均为国产试剂.