北京大学第一医院神经内科牛建平伍期专李丹姚存姗王燕

　　华包鹤丘铁道部北京铁路总医院干部医疗科薛萍

　　近年来的研究表明 :磷脂 (溶血磷脂等 )异常在心脑卒中的发生中起着重要的作用。但是 ，目前对于短暂性脑缺血发作 (ＴＩＡ)磷脂水平变化的实验研究还比较缺乏。而且临床上一些有ＴＩＡ样症状的病人 ，治疗后症状不易恢复 ，溶血磷脂水平也降低很慢。

　　中成药养血清脑颗粒有治疗偏头痛的作用 ，但对其机制还不完全清楚。偏头痛与血小板被激活、5-羟色胺的释放有关。溶血磷脂酸也可在血小板被激活时释放。那么 ，养血清脑颗粒是否对血小板激活有抑制作用 ，并进而抑制溶血磷脂的释放呢 ?为此 ，本研究以ＴＩＡ动物模型 ，观察了养血清脑颗粒对ＴＩＡ样发作的作用 ，以及对溶血磷脂酸和其他磷脂的影响。

　　资料和方法

　　材料

　　叔丁基氢过氧化物 ，购自上海试剂一厂。溶血磷脂酸测定试剂、定磷试剂购自北京泰福仕科技开发公司。养血清脑颗粒购自天津天士力公司。

　　动物与分组

　　昆明鼠共 80只 ，雌雄不限 ，体重为 ( 18～ 22)克 ，购自中国科学院动物研究所 ，动物均为北京市动物管理委员会颁布许可证的 2级小鼠。随机分成 5组 ，即正常对照组、实验对照组、剂量 1组、剂量 2组、剂量 3组、每组 16只小鼠。

　　动物模型的建立

　　参考伍期专等建立的小鼠ＴＩＡ模型。 0.11ｍｏｌ/Ｌ过氧化叔丁醇ｔ -ＢＨＰ ，尾静脉注射 ( 1ｍｌ/100ｇ体重 ) 10分钟后 ，置于约 0.3Ｌ容器中窒息 10分钟 ，观察体征。神经系统评分参见文献。

　　实验方法

　　于小鼠第 1次ＴＩＡ诱发后 ，通过食管给实验对照组、剂量 1组、剂量 2组、剂量 3组小鼠喂食蒸馏水、1.0ｇ/ｋｇ体重养血清脑颗粒、2.0ｇ/ｋｇ体重养血清脑颗粒、4.0ｇ/ｋｇ体重养血清脑颗粒。连续喂药 3天为 1个周期。一共 4个周期。于第 4次诱发的第 2天断头取血、取脑。实验期间 ，每天进行 1次评分。

　　磷脂的测定血浆溶血磷脂酸测定 (参见试剂说明书 ) :取全血置于抗凝管中 ;4 000ｇ离心 10分钟 ，吸上清 ，抽提磷脂成分 ，浓缩、分离 ，最后显色 ;于 9 0℃水浴放置 5分钟 ，取出于室温放置 35分钟后测定。脑组织的测定与以上相似 ，匀浆后直接提取磷脂成分。总中性磷脂分析 :标本用氯仿 /甲醇提取 ，高氯酸消化 ，用定磷试剂测定。酸性磷脂的测定 :在样本用氯仿 /甲醇提取后酸化。其余同中性磷脂。

　　统计学方法

　　统计用ＳＰＳＳ统计软件 8.0。多组间比较用方差分析。结果

　　磷脂水平的变化及与养血清脑颗粒剂量的关系

　　1.养血清脑颗粒对溶血磷脂酸水平的影响

　　ＴＩＡ样发作小鼠脑组织溶血磷脂酸 (ＬＰＡ)水平与正常对照相比轻度增高 ，但差异不明显。较大剂量的养血清脑冲剂 ( 4ｇ/ｋｇ体重 )增高脑组织ＬＰＡ水平。ＴＩＡ样发作小鼠血浆ＬＰＡ水平与正常对照相比有较大程度增高 ，较大剂量养血清脑颗粒 ( 4ｇ/ｋｇ体重 )使其降低。见表 1。

　　2.其他磷脂水平的改变

　　ＴＩＡ样发作小鼠的总中性磷脂、酸性磷脂等均有所改变。对于脑组织 ，ＴＩＡ发作可使中性磷脂增高而酸性磷脂下降。而血浆表现出复杂的变化特点 ，它与脑组织的变化并不完全呈平行关系。养血清脑颗粒对ＴＩＡ样发作小鼠的这种变化也有影响 ，而且与剂量有关。适当剂量的养血清脑颗粒可以使磷脂水平趋向正常。详见表 2。

　　ＴＩＡ小鼠的体征及养血清脑颗粒的作用1.养血清脑颗粒明显减轻小鼠ＴＩＡ样发作的体征养血清脑颗粒对小鼠ＴＩＡ样发作有减轻作用和促进恢复作用 ，表现为卒中评分下降。这一作用与剂量有关。小剂量 ( 1.0ｇ/ｋｇ体重 )作用不明显。剂量 2与剂量 3的作用相差不多。方差分析显示剂量 2组与不给药组差异显著 (Ｐ <0.05)。见表 3。2.不同剂量养血清脑颗粒在不同诱发阶段的作用不同剂量的养血清脑颗粒在四次诱发的各个阶段的作用如图 1所示。对于第 1、2、4次诱发 ，养血清脑颗粒均有减轻体征的作用 ，小剂量的效果不如较大剂量明显。3.ＴＩＡ体征随诱发次数增加的变化小鼠的体征随着诱发次数的增加有加重趋势 ，表现为评分值的增加。其中第 4次评分与其他几次评分值有显著差异。见图 2。它提示 :经过 4次诱发ＴＩＡ ，小鼠可能产生了不可逆变化。

　　讨论

　　血小板激活与血栓形成过程中的活性物质很多都是脂类 (包括磷脂 )或与脂类有关的物质。最近的研究还发现ＬＰＡ等也与血栓形成过程有关。当血小板被激活时可释放ＬＰＡ。它可以刺激血小板聚集和平滑肌收缩 ，并促进血管内皮细胞增殖。目前 ，关于在脑缺血时血浆和脑组织ＬＰＡ含量的变化及药物对其干预的报道很少。本研究结果表明 :与正常对照组相比 ，ＴＩＡ发作小鼠不但溶血磷脂酸明显增高 ，而且酸性磷脂和中性磷脂都有明显的改变 ，同时血浆中的变化也有类似趋势 ，但不如脑组织明显。已有的研究表明 :溶血磷脂酸在凝血和形成血栓的时候增高。但是 ，为什么中性和酸性磷脂会发生这样的变化还不清楚 ，可能与神经细胞膜受损伤有关。

　　据报道称养血清脑颗粒具有疏通血脉、活血化瘀和平肝止痛的效果。从本研究结果来看 ，它对于实验性小鼠ＴＩＡ发作有良好的作用。一方面它可以明显减轻ＴＩＡ小鼠的体征 ，使卒中评分明显降低。另一方面 ，它对于由ＴＩＡ发作导致的脑及血浆溶血磷脂酸及中性和酸性磷脂异常有纠正作用。由于这些异常是因ＴＩＡ或过氧化物导致的脑损伤所造成的 ，因此本研究表明 ，作为一种镇痛的中药制剂 ，它的作用可能不是单一的抑制与痛疼相关的神经递质 (如 5-羟色胺 ) ，而可能有更广泛的作用和更加复杂的机制。已经知道溶血磷脂酸在凝血和血栓形成时释放 ，同时又可以作用于血小板引起一系列效应。从本研究结果看 ，由于脑组织的溶血磷脂酸也明显增高 ，因此不能认为ＬＰＡ完全是由被激活的血小板释放所致。很可能在ＴＩＡ的继发性脑损伤中 ，或脑组织受到活性氧应激压力时 ，也会产生溶血磷脂酸。而养血清脑颗粒对此也有保护作用。从目前研究结果看 ，养血清脑颗粒的治疗作用主要是通过其抗自由基 ，还是通过抑制血栓形成和抑制继发性脑损伤来实现的尚不清楚。由于养血清脑颗粒有良好的疗效 ，因此它在临床上可能有着较好的应用前景。 (参考文献从略 )